HPLC基線漂移是指在高效液相色譜(HPLC)分析中,基線隨時間發(fā)生不穩(wěn)定變化的現象。這種現象可能掩蓋真實的樣品信號,導致分析結果不準確。以下是導致HPLC基線漂移的幾個主要因素:
1. **柱溫和流動相溫度波動**:
* 對于部分檢測器,尤其是示差折光檢測器或高靈敏度的紫外檢測器,柱溫和流動相的溫度波動可能導致基線有規(guī)律的上升和下降。
* 解決方法:控制好柱子和流動相的溫度,可以在進入檢測器前使用熱交換器或在檢測器之前進行溫度調節(jié)。
2. **流動相不均勻、污染、變質或由低品質溶劑配成**:
* 流動相的不均勻性、污染、變質或使用低品質溶劑可能導致基線漂移。
* 解決方法:使用HPLC級的溶劑和高純度的鹽和添加劑,對流動相進行脫氣處理。定期檢查流動相的組成,確保其品質。
3. **流通池污染或有氣體**:
* 檢測器流通池的污染或存在氣體可能導致基線漂移。
* 解決方法:采用極性強的溶劑(如甲醇)對檢測池進行沖洗。如有必要,可以使用1N濃度的稀硝酸進行沖洗(注意避免使用鹽酸,且不要接PEEK接頭)。
4. **色譜柱平衡不充分**:
* 色譜柱平衡不充分,尤其是更換流動相時,可能導致基線漂移。
* 解決方法:采用中極性強度的溶液,在分析前對色譜柱進行沖洗,沖洗的體積通常需要達到10\~20倍的色譜柱體積。
5. **樣品中的強保留物質**:
* 樣品中存在強保留的物質(高K’值)可能以饅頭峰樣被洗脫出,表現為基線的抬升。
* 解決方法:使用保護柱,并在必要時定期用強溶劑沖洗柱子。
6. **檢測器設置問題**:
* 檢測器設置不當,如波長未調整至最大吸收波長處,也可能導致基線漂移。
* 解決方法:根據實驗需求調整檢測器的設置,確保波長等參數正確。
7. **設備老化和操作技術水平**:
* 設備長時間使用后可能出現老化現象,如柱子老化、傳感器性能下降等,這些都可能導致基線漂移。
* 操作技術水平不夠熟練或設備調整不當也可能導致基線漂移。
* 解決方法:定期檢查和維護設備,確保設備處于良好狀態(tài)。同時,提高操作技術水平,確保正確調整和使用設備。
綜上所述,導致HPLC基線漂移的因素多種多樣,需要綜合考慮并采取相應的解決措施。在實驗中,應密切關注基線變化,及時發(fā)現問題并采取措施進行糾正,以確保分析結果的準確性和可靠性。